植物基因组提取为什么水浴（植物基因组的提取）

CTAB法提植物组DNA时，65℃水浴后为什么室温放置30min

水浴加热的目的是为了让DNA分理出来，更好的提取；但这么高的温度不利于下一步的实验，因此需冷却至室温。

植物基因组DNA提取的相关问题，希望专业人士解答~~谢谢

1.加入细胞提取液后，为什么要65度水浴锅保温20分钟？

不知道你用的是什么方法CTAB?细胞提取液成分能否说明？

2.70%乙醇洗涤沉淀3次有什么用啊？

去掉提取的DNA里面的的杂质，毕竟你前面的好多操作引入了很多的化学成分，有的会影响后续操作。洗涤两次就行了。

3.TE缓冲液可不可以用水代替？

可以用水代替，但是TE成分中的EDTA可以中和溶液中的金属离子，使核酸酶无法起作用，并且TE缓冲液是PH在8左右，此时DNA为盐离子状态，更容易溶于水，从而如果是从柱子上洗脱DNA的话，可以多洗脱下来的。

植物组织中DNA的提取实验中为什么设置60°的条件水浴锅操作步骤？

植物组织中第二类的体制实验设施，60岁的条件，水玉国操作步骤，这样可以使DNA不躁的破坏，并且效果也是最好的

植物基因在组DNA提取为什么在65度水浴保温2

植物基因在组DNA提取为什么在65度水浴保温

不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差

异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。

本实验以水稻幼苗为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。

DNA

一、材料

水稻幼苗

二、设备

移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离 心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。

三、试剂

1、提取缓冲液?：100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L

NaCl, 1.5% SDS。

2、提取缓冲液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。

3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇

4、 RnaseA母液：配方见第一章。

5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。

四、操作步骤：

（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取

1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?, 60?水浴预热。

2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热

的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60?水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。

3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。

4. 室温下5000rpm离心5分钟。

5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。

6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。

7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60?水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。

8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。

9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。

10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20?放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。

植物基因组提取时为什么要65度水浴保温

植物基因组提取时为什么要65度水浴保温

植物DNA提取方法

方法一：

1.取两片幼嫩新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入适量液氮，迅速研磨成粉末状，随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50ul抗氧化剂2-巯基乙醇，继续研磨成略有流动性的糊状或粥状，转入1.5ml的离心管中，于65℃水浴锅中保温约60min。

2.待混合物冷却至室温后加入等600ul的CI（氯仿：异戊醇=24：1）溶液混匀，轻轻颠倒离心管几次使管内混合物成乳浊液，常温下10000rpm离心10min,取上清液转入另一干净的离心管中。

3.重复步骤（2）一次。

4.取步骤（3）上清液加入2.5倍体积无水乙醇，仔细混匀，-20冰箱30min以上，沉淀DNA

4℃，12000rpm离心10min。

5.弃去上层有机溶剂，加500ul75%乙醇洗涤沉淀，4℃下8000rpm离心5min,弃去上清，洗涤沉淀3次。

6.倒置或者37度培养箱烘干。

7.加50ulTE缓冲液溶解DNA，于-20℃冷藏备用。

方法二：

1.

在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ,

60℃水浴预热。

2.

植物5-10g,

剪碎,

在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,

剧烈摇动混匀,

60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高),

不时摇动。

3.

加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,

颠倒混匀(需带手套,

防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟,

使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。

4.

室温下5000rpm离心5分钟。

5.

仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。

6.

在1.5mleppendorf中加入1ml

TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。

7.

如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟,

再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。

8.

将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管。

9.

加入5μlRNaseA(10μg/μl),

37℃

10分钟,

除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。

10.

加入1/10体积的3mol/L

NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。

11.

用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。

12.

将DNA重溶解于1ml

TE,

-20贮存。

13.

取2μlDNA样品在0.7%

Agarose胶上电泳,

检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍,

测定OD260/OD280,

检测DNA含量及质量。

提取植物DNA为什么要60℃保温水浴,仅仅是要破坏细胞DNA降解酶的活性吗？保护DNA？还有什么作用？

DNA与本质为蛋白质的酶对温度的耐受性不同，蛋白质在60-80度会变性，而DNA在80度以上才会变性，60℃保温水浴能破坏细胞DNA降解酶的活性同时还能保护DNA。

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